【離心課堂】等密度梯度離心法 | 你的分離純化方法選對了嗎？

離心方法——等密度梯度離心法

等密度梯度離心也稱為平衡密度梯度離心。等密度梯度離心是根據樣品中各組分的浮力密度差不同進行分離。在離心立場中，溶液中顆粒浮力密度小則上浮，浮力密度大則下沉，上浮和下沉的顆粒會一直延梯度液移動到與其浮力密度恰好相等的位置上，該位置也稱顆粒的等密度點，離心時樣品各組分顆粒將按其密度大小分別移至等密度點形成區帶，形成的區帶不會因離心時間長而發生變化。離心后收集所需區帶顆粒即為純化組分。離心前后樣品的狀態如圖1所示。

圖 1 等密度區帶離心

因此，在離心前，樣品可置于梯度液的任意位置，一般是均勻分布在梯度液中。等密度區帶離心法的離心效果取決于樣品顆粒的浮力密度差，密度差越大，分離效果越顯著，與樣品顆粒的大小與形狀無關。

速率區帶離心和等密度區帶離心都需預準備梯度液。速率區帶離心的梯度液密度必須小于待分離組分中小顆粒的浮力密度。利用顆粒形狀和大小差異而形成的沉降速率不同達到分離目的。等密度區帶離心是一種平衡離心方法，利用顆粒密度差進行分離，與顆粒形狀和大小無關，處理量比差速離心法大。

等密度梯度離心經常使用的梯度液包括氯化銫(CsCI)、溴化鈉等，典型的應用包括質粒DNA（或者其他DNA、RNA核酸片段）的大規模高純度純化，脂蛋白的分離純化等。

質粒DNA的氯化銫等密度梯度離心分離純化流程如下：

脂蛋白溴化鈉等密度梯度離心分離純化流程如下：

1、

人全血1000g離心10分鐘去除各種血細胞，上清為血清。

2、

血清加入NaBr密度梯度液（不連續梯度）的底部，往上依次鋪濃度變小的梯度液。

3、

然后在水平轉頭中，260,000g離心力14℃下離心24小時，各種密度的脂蛋白從管底浮向它們自己的等密度區形成了純的各種密度脂蛋白區。而離心管底部保留著各種血清蛋白。

4、

用上排法從離心管中抽出各層液體，經DU核酸蛋白分析儀測定，定位各種不同密度血清脂蛋白。

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