密度梯度離心機在試驗中應該如何進行操作？

　　密度梯度離心機技術是用一定的介質在離心管內形成一連續或不連續的密度梯度，將細胞混懸液或勻漿置于介質的頂部，通過重力或離心力場的作用使細胞分層、分離。這類分離又可分為速度沉降和等密度沉降平衡兩種。密度梯度離心機技術常用的介質為氯化銫，蔗糖和多聚蔗糖。
 

　　密度梯度離心機試驗操作過程如下：
 

　　1、將收集的組織或臟器或其他,用玻璃勻漿器充分研磨后制成懸液,經反復凍融3 次后,置- 20 ℃冰箱中,備用。
 

　　2、先以5000g離心15分鐘后，獲取上清夜，然后再20000g高速離心30分鐘后取上清夜。
 

　　3、接著10萬g超速離心2h，將沉淀用少量STE溶解。
 

　　4、先在超速離心管中加入5-8mL的第3步所獲取的含病毒樣品的溶解液，然后在離心管中依次加入30 % , 45 % , 60 %的蔗糖,加的時候是用長針頭從底部往上加的。11萬g離心2.5h,發現在30 %與45 % 以及45 % 與60 %之間都有一條明亮的帶，用長針頭將兩條不同部位的帶都吸取出來，分別收集到不同的瓶內。
 

　　5、去蔗糖；用STE緩沖液適量稀釋純化的病毒，然后11萬g離心3h,用少量STE緩沖液把沉淀懸起，即后獲得了純化的病毒。-20度凍純備用，用時可用分光光度計測定其病毒含量。

　　密度梯度離心機分離活細胞的介質要求：
 

　　1、能產生密度梯度，且密度高時，粘度不高。
 

　　2、PH中性或易調為中性。
 

　　3、濃度大時滲透壓不大。
 

　　4、對細胞無毒。區帶離心法是將樣品加在惰性梯度介質中進行離心沉降或沉降平衡，在一定的離心力下把顆粒分配到梯度中某些特定位置上，形成不同區帶的分離方法。